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Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

2019-09-16

Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

 

 

 

 

 

摘要:

以石斑鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%。

 

 

 

 

 

  • 样品前处理
  1. 所用试剂
    1. 浓盐酸,浓度≥36%,优级纯
    2. 6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。
    3. 水:去离子水
    4. 苯酚:须重蒸
    5. 17种氨基酸标准品
  •  
  •  
  •  
  •  

1

Asp       

  •  

2

Thr

  •  

3

Ser       

  •  

4

Glu

  •  

5

Pro       

  •  

6

Gly

  •  

7

Ala       

  •  

8

Cys

  •  

9

Val       

  •  

10

Met

  •  

11

Ile        

  •  

12

Leu

  •  

13

Tyr

  •  

14

Phe       

  •  

15

His

  •  

16

Lys

  •  

17

Arg

  •  

 

 

 

 

  1. 前处理设备
  1. 分析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。
  2. 水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL
  3. 匀浆机。
  4. 无油真空泵
  5. 干浴水解浓缩仪
  6. 移液管
  7. 0。22um滤膜

 

  1. 样品制备(参考国标GB 5009.124-2016

原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。

 

  1. 试样水解

称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0。22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用

 

  • 分析方法描述(Biochrom 30+
  •  
  1. 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4。6´20cm
  2. 分离程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

 

2

00:00

48

1

35。0ml/h

ON

OFF

Reset

3

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

06:40

48

1

35.0ml/h

ON

ON

 

5

13:00

52

2

35.0ml/h

ON

ON

 

6

01:00

52

5

35。0ml/h

ON

ON

 

7

16:00

95

5

35.0ml/h

ON

ON

 

8

04:00

95

6

35.0ml/h

ON

ON

 

9

04:00

95

1

35.0ml/h

ON

ON

 

10

09:00

48

1

43.0ml/h

OFF

OFF

 

11

02:00

48

1

35。0ml/h

ON

OFF

 

End

 

 

 

 

 

 

 

 

  1. 运行时间:经分析时间+再生时间 57min
  2. 反应单元温度:135°C
  3. 检测波长:570nm440nm同时检测。

 

 

  • 样品中氨基酸含量的计算

   样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

式中:

ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。

 

试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

式中:

Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

F ———稀释倍数;

V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

m ———称样量,单位为克(g);

109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

100 ———换算系数。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

附、石斑鱼分析图谱及做样结果

 

 

 

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