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Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测鱼料中氨基酸

2020-05-13

 

一、样品前处理

 

1、所用试剂

1、1  浓盐酸,优级纯

鼎盛彩票app1、2  6mol/L 盐酸:浓盐酸与水1:1混合

1、3  水:去离子水

1、4  苯酚:须重蒸

鼎盛彩票app1、5  19种氨基酸标准品

 

2、标样配置

  •  氨基酸混合标准储备液:含有天冬氨酸、苏氨酸等17种常见组成蛋白质的氨基酸。

  •    牛磺酸标准储备液:用PH2。2的柠檬酸缓冲液配置成2。5umol/L的储备液备用。

  •    正亮氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

  •    璜基丙氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

  • 鼎盛彩票app蛋氨酸砜标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

  • 羟脯氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

  • 鸟氨酸标准储备液:用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

将17种氨基酸混合标准储备液、牛磺酸、正亮氨酸、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羟脯氨酸、鸟氨酸及PH2.2的柠檬酸缓冲液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的标准品待用。

 

3、前处理设备

1)     天平   

2)     水解管  

3)     量筒  

4)     无油真空泵  

5)     干浴水解、浓缩仪  

6)     移液管  

7)     0.45um滤膜   

 

4、样品制备(参考欧盟饲料指令98/64/EC )

 

1、样品的准备

粉碎样品,通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油(3.12)脱脂。

2、氧化

从准备好的样品中称取约0.1~1克样品,准确到0.2mg,于100 ml带螺纹盖子的瓶子中,称取的样品应该含有大约10mg氮,水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却至0℃,加5ml氧化试剂(过甲酸苯酚),用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小时。之后,从冰箱中取出,加0.84克偏重亚硫酸钠(3.4)来分解过量的氧化试剂。

3、水解

鼎盛彩票app 加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中,温度控制在110摄氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水解1小时。然后快速旋紧瓶塞(戴手套和护眼罩)将其继续在烘箱110摄氏度下水解23小时。

4、加入内标并且调节pH值到2.20

当水解反应结束后,将反应瓶从烘箱中取出,并且打开瓶口(戴手套和护目镜)。冷却后用定量加样器准确加入15.00克(15毫升)正亮氨酸标准溶液,混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大约125毫升柠檬酸缓冲液和19毫升氢氧化钠水溶液,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正好2.20。转移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定。

 

二、分析方法描述(Biochrom 30+)

鼎盛彩票app氨基酸分析仪分析方法参数:

1)  色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6X20cm

2)  分离程序:

3)     运行时间:分析时间65min

4)     反应单元温度:135°C。

5)     检测波长:570nm、440nm同时检测。

 

附、鱼料分析图谱及做样结果

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